タンパク精製とらいあるあんどえらー

近頃分泌型タンパク質をSf9細胞に作らせております。
増えへんし。(外注してますが)
精製する以前にちゃんと壊れてへんし。
いや、破砕中に壊れている可能性もあるし。
でもまあちょっとずつ前進中…?


精製に使用するカラムは4本。一本3000円以上…っ
プロトコルとしては
ニッケル

ヘパリン

(透析)

(プロテアーゼによるHisタグ切断)

ニッケルにてタグ除去

ベンズアミジンにてプロテアーゼ除去

(透析)


…で、やっと回収、銀染色/Westernという2日がかりの大作業。
大変なので1回目の透析前にチェックしてますが、どうもヘパリンカラムから溶出してない。
かといってflowthroughにも存在しない。
ヘパリン内がそんなに居心地よいんですかね…(T_T)
塩濃度、相当高いはずですが。