けちけちWestern（これも大学院はてな？）
Western-blotをしている方に質問。
「抗体は、どうやって反応させていますか？」
うちは１次を50mlFalconに5ml抗体希釈液を入れて、低温室でo/n。rotatorでぐるぐるします。
２次抗体はハイブリバッグに入れて室温１時間shakerにて。
同じ抗体でメンブレン２枚〜の場合は１次抗体でもハイブリバッグ使用です。
先日教わった方法は
パラフィルムを置いて、その上にblot面を上にしてメンブレンを乗せる。
抗体を200-500ulメンブレン上に滴下。
もう一枚のパラフィルムでサンドして室温１時間。
というものでした。
抗体使用量が通常の1/10以下です。
すばらしい！
結果の方はちょっと…でしたけど、この方法ではなくサンプル自体の問題なのでした。
大量発現タンパク*1だったので、１次抗体１時間でも大丈夫、ということでこの方法にtryしたわけです。
貴重な抗体を使うときにはいいですね。
いつも1/10000とか1/5000で使える抗体ばかりなので使用後はそのまま廃棄してます。
ちょっと節約意識を持たねば…
あ、もしかして、常識？私がモノ知らずなだけ？やべ。
ちなみにうちのラボではカバーガラスにくっつけた凍結切片の免疫染色時*2にも同様の方法を用いております。
