頼むで、しかし！（やっさん風）

教官に頼まれていたサブクローニング、何度やってもうまくいかなかったんです。
コロニーPCRあたりでつまづいて、ミニプレップしてもPCRでチェックすると増えてないし、でも大元のplasmidなら増やせる、ということでprimer設計を再検討したりなんやかややっていました。

今日改めておかしい、ということで一番最初に切り出した時のゲル写真を見ると、どうも予想されるサイズよりも小さい。
元々のサイズが6k弱と大きかったんで気づかなかったのですが、よく見るとシークエンスを調べてくれたポスドクさんが言うところのサイズより1kほど小さいんです。

結論。
ratだと思ってたけどhumanDNAでした
結局、ratDNAなら全長が切り出されるはずなのが、humanだと実は制限酵素サイトが内部にあって、見事にPCRprimer部分が切り落とされていたものを使ってたのでした。
そら増えんわ。ぜったいに。

私は頼まれたままに動いただけですよー。時間を返せ(T_T)